電泳槽的使用方法及注意事項(xiàng)

        所謂電泳是指帶電粒子在電場中的運(yùn)動(dòng)。由于電荷和分子量不同，不同的物質(zhì)在電場中以不同的速度移動(dòng)。根據(jù)這一特點(diǎn)，可以利用電泳對不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析。 ，或某種混合物用于成分分析或單成分提取制備，在臨床試驗(yàn)或?qū)嶒?yàn)研究中具有極其重要的意義。電泳儀就是根據(jù)上述原理設(shè)計(jì)制造的。下面簡單介紹一下它的用法和注意事項(xiàng)。
        如何使用
        1、先用電線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端連接起來，注意不要接反。
         2、將電泳儀的電源開關(guān)轉(zhuǎn)到關(guān)閉位置，將電壓旋鈕轉(zhuǎn)到較小的位置，根據(jù)工作需要選擇電壓電流的電壓電流范圍。
         3. 打開電源，緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)電壓調(diào)節(jié)旋鈕，直到達(dá)到所需電壓，設(shè)置電泳終止時(shí)間，然后開始電泳。
         4、工作完成后，轉(zhuǎn)動(dòng)旋鈕開關(guān)至零位或關(guān)閉狀態(tài)，拔出電泳插頭。
        筆記
        1、電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后，嚴(yán)禁人體接觸電極、電泳物體等可能帶電的部位，也不得在電泳槽內(nèi)取放東西。如有必要，請先關(guān)閉電源，以免觸電。同時(shí)儀表必須有良好的接地端子，防止漏電。
         2、儀器通電后，請勿臨時(shí)加拔輸出引線插頭，以防短路。雖然儀器裝有保險(xiǎn)絲，但短路仍可能對儀器造成損壞。
         3.由于不同介質(zhì)支撐的電阻值不同，電泳時(shí)通過的電流量也不同，游泳速度和到達(dá)終點(diǎn)所需的時(shí)間也不同。因此，不同介質(zhì)載體的電泳不應(yīng)在同一臺電泳儀上同時(shí)進(jìn)行。
         4、當(dāng)總電流不超過儀表額定電流（電流量程較大）時(shí)，可以多槽聯(lián)合使用，但一定要注意不要帶載，否則容易影響儀表壽命。
         5、在某些特殊情況下，當(dāng)需要檢查儀器的電泳輸入時(shí)，允許在穩(wěn)態(tài)下空載開機(jī)，但在穩(wěn)態(tài)下開機(jī)前必須先接負(fù)載，否則電壓表指針會(huì)跳的很大，容易造成不必要的人機(jī)損壞。
         6、在使用過程中如發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如巨響、放電、異味等，必須立即切斷電源進(jìn)行維修，以免發(fā)生事故。
        夾層式立式電泳槽使用方法：
        一、零部件
        (一)鉑絲儲罐一對，配備冷卻裝置和電泳緩沖液出口。
         (二)凹膠框，配玻璃板，可制作厚度分別為1mm和1.5mm的凝膠板。操作時(shí)，選擇合適厚度的玻璃板和梳子配套使用。
         (3) 樣品孔模具（梳子）用于電泳加載。
         (4) 固定儲液罐的螺釘和螺母有4對，28D和30型有5對。
         (5) 五個(gè)橡膠管。兩個(gè)長的用來連接冷卻水的進(jìn)出水口；兩個(gè)中長的用于連接電極緩沖器；介質(zhì)液體出口；較短的一根用于連接儲罐之間的冷卻水。
         (六)電線1對。 2. 使用方法
        (一)清洗零件
        上述零件在組裝前必須*清潔。尤其是玻璃板和凹槽膠框，必須用泡沫海綿蘸少許肥皂粉或清潔劑*清潔。清洗干凈的玻璃板應(yīng)放在玻璃板架上，用水晾干后方可使用。
         (二)組裝電泳槽
        A. 1、將四顆固定螺絲插入儲液架（半上罐）對應(yīng)的孔中，然后將儲液架放在工作臺上。
         2、左手握住凹槽膠?？?，右手拇指和中指握住玻璃板的兩邊緣，插入膠模框（注意手指不能碰到玻璃板在膠面上）。
         3、將帶玻璃的橡膠?？蚍旁趦σ汗蘅蚣艿纳蟼?cè)，其下緣必須與儲液罐框架的下緣對齊。
         4. 用雙手拿起另一個(gè)儲液罐架，將其與桌面背面的儲液罐架對齊，并在位于儲液架有機(jī)玻璃架的橡膠架上做凸線坦克。
         5. 安裝四個(gè)螺母并擰緊螺釘。注意擰緊螺絲時(shí)用力要均勻，用雙手以斜角逐漸擰緊螺絲。
         6. 將電泳槽垂直豎立，放在桌面上。玻璃板較短的儲罐稱為上罐（陰），玻璃板較長的儲罐稱為下罐（陽）。它在長玻璃板上。膠框之間有間隙。這個(gè)間隙可以沿著長玻璃板的下端用融化的 10% 瓊脂填充。為防止氣泡滯留，可將一端稍稍抬起，將氣泡趕走。瓊脂*凝固后即可倒入凝膠。
         B、也可以垂直豎起凹槽，將裝有玻璃的橡膠模框直接放入凹槽中，對稱擰緊螺絲，用瓊脂封底。
         (3)澆注膠
        1、先澆分離膠，凝固后再澆濃縮膠。灌膠前先連接冷卻水，夾住連接上下液槽的兩根膠管。
         2、用細(xì)尖滴管吸膠，從一端沿長短玻璃板的縫隙加入膠水。為了防止氣泡，把另一端稍微拿起（氣泡往高處），繼續(xù)加膠水。對于單層膠（分離膠），加膠量距離短玻璃板頂部0.3厘米左右。輕輕加入少許水，用雙手輕輕插入梳子。膠凝后，可以形成一個(gè)凹進(jìn)的樣品孔。
         3、為防止漏膠，應(yīng)立即在上下儲液罐中加入蒸餾水，但蒸餾水不能太短于玻璃板邊緣。
         4.凝膠凝固后，可以看到樣品槽梳子和凝膠板之間有一層亮區(qū)
        具有不同的發(fā)射率。
         (四)取樣
        1. 松開連接上下水箱的兩根橡膠管上的夾子，放掉水箱中的蒸餾水，待水流出后再夾上夾子。
         2、用雙手輕輕取出樣品梳，可以看到清晰的樣品孔，并吸去孔內(nèi)的水分（注意不要損壞孔的字面）。
         3、上下儲液罐加慢；中間液體，液體高度應(yīng)*超過上液罐的短玻璃板邊緣。
         4、用微量注射器吸取一定量的樣品加入長短玻璃板之間的凹凝膠樣品孔中（注意加入樣品的動(dòng)作要輕，針頭不能損壞橡膠表面）。
         (五)電泳
        一根儲罐線接電泳儀負(fù)極，下儲罐線接電泳儀正極。檢查接線是否正確，即可按要求的電壓和電流進(jìn)行電泳。
         (六)拆膠板
        電泳結(jié)束后，松開螺母，取出膠框，撕下玻璃板，在兩塊玻璃板下角之間的縫隙中，用刀片背面輕輕一撬膠面將玻璃板分開，將帶有橡膠板的玻璃板放在桌面上，用雙手沿著凝膠底部輕輕握住薄膜，然后將其放入一個(gè)大的培養(yǎng)皿中進(jìn)行染色。漂洗脫色后可以清晰地看到橡膠板。條帶分離
        常見問題及解決方法： 1、紋路和拖尾：是樣品溶解不良造成的?？朔姆椒梢栽诩訕忧跋入x心，加一些尿素等增溶輔助試劑。
         2. 蛋白條帶太寬。當(dāng)連接到相鄰泳道的蛋白條帶時(shí)，由于上樣量過大，可以減少上樣量。
         3. 電泳時(shí)間比平時(shí)長?？赡苁怯捎谀z緩沖體系和電極緩沖體系的pH選擇錯(cuò)誤，即緩沖體系的pH與被分離物質(zhì)的等電點(diǎn)相差過小，或者被分離物質(zhì)的離子強(qiáng)度。緩沖系統(tǒng)過高。
         4. 指示器變成微笑符號（指示器正面顯示向上的曲線），說明凝膠冷卻不均勻，中間部分冷卻不好，導(dǎo)致分子的流動(dòng)性不同。
         5. 由于電泳槽的原因，指示器變成哭臉符號（指示器正面呈向下的曲線）該裝置不適用，特別是凝膠和玻璃板組成的“夾心"底部有氣泡或隔膜附近的凝膠未*聚合時(shí)。
         6.凝膠時(shí)間錯(cuò)誤。通常凝膠會(huì)在 60 分鐘，1 小時(shí)內(nèi)凝固。如果設(shè)定時(shí)間太慢，可能是TEMEN、APS劑量不夠或失效。 APS現(xiàn)在應(yīng)該準(zhǔn)備好使用了，TEMED不穩(wěn)定，容易被氧化成黃色。如果凝固過快，可能是 APS 和 TEMED 的量過多。這時(shí)候凝膠太硬容易開裂，電泳時(shí)容易燒壞凝膠。